用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、抽血技巧。操作要輕柔迅速。試管可翻轉8-10次使樣本與抗凝劑混勻，避免劇烈搖晃?；靹蚝?，將試管固定垂直放置于離心分離器，在頂部記錄抽血的準確時(shí)間，因為抽血與離心之間的時(shí)間間隔可能是一個(gè)影響因素。外泌體在抽血后30分鐘內是比較穩定的，若時(shí)間過(guò)長(cháng)將導致外泌體數量增加。血小板極易因抽血時(shí)的物理因素而并釋放出外泌體，其中包括接觸、壓力、切力。2、抽血時(shí)間。除了血液黏度，體內血液的各項指標在1天中變化很大。生理節律會(huì )對血小板的產(chǎn)生很大的影響。白細胞的募集和循環(huán)系統中促炎細胞和細胞會(huì )隨時(shí)間變化。大量的具有特殊表面分子的微粒也被證明會(huì )隨時(shí)間變化。目前尚無(wú)設計較好的實(shí)驗對證實(shí)不同時(shí)間血液中外泌體的變化，故應在相同的時(shí)間采集樣本。目前飲食是否會(huì )對EV產(chǎn)生影響尚未可知，但是由于脂蛋白可運載RNA且食物的攝取可以影響循環(huán)脂蛋白顆粒的類(lèi)型、數量和作用，故抽血可在較后一次用餐后一段確定的時(shí)間進(jìn)行。這些試劑盒不需要特殊設備，隨著(zhù)產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化效果逐漸提高。金華正規外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

外泌體在肺病進(jìn)程中的作用：肺病細胞來(lái)源外泌體（LCC-exosome）可以通過(guò)刺激一些病癥血管的形成來(lái)促進(jìn)一些病癥的生長(cháng)。據相關(guān)報道稱(chēng)，LCC-exosome中的miR-210可以通過(guò)調節基質(zhì)細胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進(jìn)一些病癥血管的生成；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過(guò)啟動(dòng)脯氨酰羥化酶及壓制緊密結合蛋白ZO-1來(lái)促進(jìn)肺病的生血管作用。此外，有研究發(fā)現，外泌體中的內容物可以觸發(fā)上皮-間質(zhì)轉化（EMT）。晚期肺病患者血清中外泌體波形蛋白表達增加，促使人正常支氣管上皮細胞出現EMT，從而使肺支氣管正常上皮細胞出現增殖，遷移能力。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍濟南外泌體提取試劑廠(chǎng)家供應獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)。

外泌體可通過(guò)流式、WB（檢測指標有CD9,CD63,CD81）、電鏡觀(guān)察、NTA粒徑追蹤等手段檢測，普遍應用于藥物載體、疾病診斷marker、精細醫療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小，樣本含量低，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止，仍沒(méi)有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進(jìn)行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具，可以通過(guò)調節免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖，血管新生和一些病癥轉移。與細菌傳染，幫助細菌逃避免疫關(guān)系很大，并與心血管疾病，老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系

外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來(lái)。磁珠法具有特異性高、操作簡(jiǎn)便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗，難以普遍普及。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集菌類(lèi)，現在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物。色譜法。這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。

外泌體的形成與鑒定：首先，細胞膜內陷形成一個(gè)杯狀結構，包括細胞表面蛋白和與細胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白，導致早期胞內體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結構直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內體(late-sortingendosomes，LSEs)，較終形成MVBs(也稱(chēng)為多囊內小體)。MVBs是通過(guò)endosome限制膜向內凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的，這一過(guò)程導致MVBs含有多個(gè)ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調節蛋白等。外泌體可以包含不同類(lèi)型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜，通過(guò)離心截留上清中的外泌體，截留完成后利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。正規外泌體提取試劑銷(xiāo)售廠(chǎng)家

外泌體（Exosome）發(fā)現于1986年，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結構小體。金華正規外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒，組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過(guò)濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項：1.對于待測樣品粘度過(guò)大時(shí)，可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí)，可用4℃預冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。3.針對外泌體標志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進(jìn)行Westernblot檢測，可以鑒定所提的外泌體。通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。金華正規外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

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